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        2. 西安科創實驗室設備有限公司

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          新聞資訊

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          如何避免以及處理PCR實驗室污染?

          發布時間:2022-02-23 14:10:36

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          PCR檢測因其高靈敏度、快速、操作方便等優勢已經被廣泛應用,不過正是由于它靈敏度極高,極微量的污染源都有可能導致檢測結果的假陽性,因此,如何避免以及處理實驗室污染,對PCR人來說是一門必修課。(實驗室建設設計

          一、實驗室污染分類

          樣本間交叉污染

          主要是在采(。拥倪^程中,由于取樣工具之間的交叉造成污染;或者在核酸提取的過程中,由于移液器、離心管等使用不當導致的污染。(實驗室建設設計) 

          PCR試劑的污染

          主要是在PCR試劑配制過程中,由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。

          克隆質粒的污染

          在實驗室操作中經常會用到陽性參考品,這些陽性參考品大多數是由某些克隆質粒制作而成,克隆質粒在單位容積內濃度高,不小心使用極易造成污染。(實驗室建設設計

          PCR擴增產物污染實驗室建設設計

          這是PCR反應中最主要最常見的污染問題。因為PCR產物拷貝量大,遠遠高于PCR檢測數個拷貝的極限,所以極微量的PCR產物污染,就可造成假陽性結果。還有一種容易忽視,最可能造成PCR產物污染的形式是氣溶膠污染,在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠,據計算一個氣溶膠顆?珊4.8萬拷貝,因而由其造成的污染是一個值得特別重視的問題。

          二、消除污染的操作步驟

          1.物料準備

          (1)購買噴壺(能夠噴出霧狀水汽的即可);
          (2)購買市面上有效氯消毒片,根據要求配制不同濃度的消毒液,或者購買成品次氯酸鈉消毒液配制合適濃度消毒水;(實驗室建設設計
          (3)購買核酸氣溶膠污染清除劑(DNA AWAY®原液/MediClean®稀釋100倍);
          (4)無紡布/無塵紙等。

          2.處理方法實驗室建設設計

          (1)清理廢液缸并且對廢液缸用有效氯含量為2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染;
          (2)用有效氯含量為2000mg/L消毒水對移液槍進行擦洗,關鍵部位為移液槍前端易污染部位,清潔干凈后用潔凈水再擦拭一遍;
          (3)將離心管架、擴增管架、擴增管架底板、吸嘴盒及其他相關物品用有效氯含量為500mg/L的消毒水浸泡2小時后,用清水沖洗干凈晾干后使用;
          (4)對污染區域內的設備如擴增儀、全自動提取儀等,使用核酸氣溶膠污染清除劑進行反復處理;對生物安全柜等含有空氣過濾系統的設備,需更換過濾網;(實驗室建設設計

          (5)用有效氯含量為500mg/L的消毒液對整個實驗室(地板、墻面、天花板、門、窗戶等地方)進行清潔,并且用用有效氯含量為1000mg/L的消毒水對實驗室進行噴霧消毒(重點部位為操作區),有效降解空氣中的氣溶膠與附著在實驗臺表面的核酸污染;同時加大通風量(內循環無用,盡可能外循環);
          (6)待污染區域及設備器件清理完成后,常用設備和操作臺面使用移動紫外消毒車近距離輻照1小時;實驗室內則使用室內紫外燈整晚輻照。(實驗室建設設計
          步驟(1)-(6)必須堅持每天進行,確保消除實驗室污染;

          3.污染消除判斷標準實驗室建設設計

          設計陰性對照組,根據陰性對照確認污染情況?墒褂贸ㄩ_后隔夜放置操作區的陰性對照進行實驗(在單獨的實驗室驗證),若連續三天陰性對照沒有起跳,則說明污染得到控制,可恢復正常實驗。
          當然,為最大程度的降低可能出現的PCR污染或杜絕污染的出現,在實驗室前期設計及日常實驗室管理和操作中,就需要進行合理的規劃以及嚴格執行實驗室SOP,把污染的可能性扼殺在搖籃中。(實驗室建設設計
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